品名：Y-Tec大肠杆菌超级裂解液

英文名：Y-Tec E.coli super Lysis Buffer

货号：YSD0104-10/YSD0104-100/ YSD0104-500     

规格：10ml/100mL/500ml

➽产品特色：

Y-Tec大肠杆菌超级裂解液(Y-Tec E.coli super Lysis Buffer)，是专用于大肠杆菌菌体裂解的裂解液，无需超声，操作快速(无需超声，10min内完成)、成分温和(不含变性溶剂成分，可保持原始蛋白活性与结构)、高效裂解(1min即可释放>80%菌体蛋白)，释放菌体内蛋白。

本产品为单组份，操作简单、重复性好。含有的溶菌酶，核酸酶成分，可以在 10 分钟内破裂细菌细胞壁，将其降解为胞壁二糖；含有的核酸酶可消化菌体内的DNA和RNA核酸成分，将其降解为寡聚核苷酸片段。使用本产品可以有效降低细菌裂解后上清粘度，抑制目的蛋白的降解，提高后续样品澄清效果，提升样品上柱纯化的效率，减少内毒素污染。

➽操作步骤：

1.对细菌进行培养 ，诱导表达目的蛋白。

2.通过离心、超滤等适当方法 ，去除发酵液上清 ，收集菌体 ，对菌体进行称重 ，记录重量。

3.菌体重悬
按1g 湿菌体(约300ml菌液离心后质量)对应加入9mL TBS缓冲液(20 mM Tris，150 mM NaCl，pH 7.6)的比例，对菌体进行充分重悬,请务必确保重悬分散充分，尽量采用旋涡震荡、磁力搅拌。
注：重悬缓冲液不建议使用磷酸盐（PBS）成分，磷酸盐会部分抑制核酸酶活性，若选择磷酸盐buffer重悬，可适当延长裂菌时间10-20min。

4.菌体裂解 
(1)按照菌体重悬液体积的 1/9（V/V ，举例：用9 mL TBS缓冲液重悬菌体，加 1 mL裂菌液）加入Y-Tec大肠杆菌免超声快速裂解液 ，搅拌或振荡混合均匀。

(2) 将加入裂解液的样品置于 4-25℃条件下（可根据蛋白稳定性进行合理选择），裂解 3-10分钟(建议4℃-10min) ，裂解结束会看到菌体悬液从浑浊状态逐步会变清亮半透明。
注：针对可溶性蛋白，可选择快速裂解，约3分钟即可释放85%以上目的蛋白至上清中；针对包涵体蛋白，选择更长裂菌时间10min，以保证充分消化细胞壁，获得纯度更高的包涵体。

(3) 裂解结束后离心样品（离心力＞8000g）5min，分离上清与沉淀。若目的蛋白为可溶蛋白，取上清进行后续纯化；若目的蛋白是包涵体，收集沉淀样品，对沉淀中的包涵体进行洗涤、变性溶解后，使用适当方法进行纯化。

➽保存条件：

4℃运输，4℃可短期保存60天，-20℃可长期保存24个月

➽注意事项：

1.本产品成分含有溶菌酶与核酸酶成分，建议收到后第一时间分装处理保存至-20℃以避免反复冻融，溶菌酶消化细胞壁方式进行破壁，会释放胞壁二糖成份，可竞争结合麦芽糖结合蛋白的底物结合位点，因此本产品与MBP-tag 纯化体系不兼容。其它常见的 His-tag、GST-tag、Tactin II-tag、FC-tag、S-tag、protein A-tag、 CBD-tag 等标签纯化不受影响。

2.本产品成分含温和的非离子型去垢剂，不会造成蛋白失活，使用的复合溶菌酶以及超级核酸酶均不带纯化标签，不会干扰下游纯化实验。

3.包涵体表达蛋白优化建议:
(1)IPTG诱导浓度：10μM-1mM，诱导剂浓度对于目的蛋白的溶解性影响不大，一般无需在摸索诱导剂浓度上浪费时间，一般推荐使用0.1 mM 为最佳IPTG诱导浓度。
(2)若希望改善蛋白可溶比例，优先考虑低温以及增加促溶标签。乳糖也可以很好的诱导特定启动子的表达，最终收获的菌量会比IPTG更高。
(3)LB培养基中，37℃诱导4小时目的蛋白表达量即达到高峰，可以收集菌体。如果使用低温诱导,诱导时间可适当延长至6-8 小时。过夜诱导对于大部分蛋白的表达并没有明显的收益,菌量增加很少但降解条带增多。

4. 实验室的 LB 培养基表达，1L培养液约收获菌体约为3g，可按照1L收获的菌体加入27 mL TBS 缓冲液，低温震荡或者超声清洗槽内超声分散完全后加入3ml Y-Tec大肠杆菌免超声快速裂解液(如果是发酵罐高密度发酵，1L培养基收获菌体可达100 g(需按比例增加裂解液)。收获菌体暂时不进行后续纯化实验，需保存在-20 ℃或-80 ℃冰箱中以防止降解。

5. 室温 20-25 ℃条件下，裂菌液含有的酶活力较高 ，但通常推荐 4 ℃低温裂菌 ，以控制目的蛋白的降解。

6.  Y-Tec大肠杆菌免超声快速裂解液不含有螯合剂 EDTA, 不会造成镍离子的脱落，但通常考虑到后续放大的重复性，在使用镍亲和填料体系的时候 ，推荐使用第三代Ni Smart(或Ni TED)亲和填料，这一产品高度耐碱清洗，可耐受多次重复使用无需再生。

7. 本产品仅供科研，请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。

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