➽产品介绍:

Protein A/G Magbeads是Protein A/G高密度定向包被到超顺磁性聚合物微球表面 ，该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,一步富集纯化即可从样品中富集分离出纯度大于 90%的抗体，主要用于IP与ChIP实验。

➽产品性能：

Magbeads粒径：1μm（聚合物磁性微球）

储存液：20 mM Tris PH 7.4, 0.01%Tw20（v/v） ，0.05%kv300（v/v）

结合能力：> 50 µg Rabbit IgG/mg 磁珠

磁珠浓度：10mg/ml

配体：重组蛋白 A/G

用量：25-50ul混和液/样本

储存条件: 2-8℃保存2年，切勿冰冻

➽免疫沉淀操作流程

1) 磁珠使用量建议：

针对各种标准培养皿的裂解缓冲液的推荐使用体积： 

• 磁珠准备：

a 将Protein A/G Magbeads颠倒或漩涡混合均匀。

b 取50μl Protein A/G Magbeads加入新的离心管中。放置在磁分离器上 ，待溶液变澄清后 ，用移液器吸弃保护液。

c 将离心管从磁分离器上取下来 ，加入 200μl平衡液 ，混匀 ，放置在磁分离器上 ，收集磁珠 ，用移液器吸弃保护液。重复洗 2 次。

• 抗体吸附：

a 加入抗体溶液（5-25 μg 抗体总量） ，充分混匀 ，体积不足 500 μl 时用平衡液补足。

b 室温孵育 10 min 以上（具体时间根据结合效果调整） ，可以振荡或漩涡混合均匀。

c 将离心管置于磁分离器上 ，待磁珠全部吸附后 ，吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。

d 加入 500 μl 洗杂液混合均匀 ，置于磁分离器上 ，待磁珠全部吸附后 ，吸弃上清液。重复洗杂至少 3 次。

• 抗原结合反应：

a 加入含有抗原的细胞裂解样品（通常100-1000μl) ，用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。

b 在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10 min ，使抗原与抗体充分结合 ，如结合力较弱则可在室温下反应 1 h 或者在4℃下反应过夜。

c  上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离 ，收集上清液 ，以备后续检测。

d  向离心管中加入1 ml 洗杂液，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，弃上清液；从磁分离器上取下离心管 ，再重复洗涤两次。

5)  性洗脱 -此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。

a  从磁分离器上取下离心管 ，向其中加入25μl 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，95℃加热 10 min。

b  置于磁性分离器上 ，进行磁性分离 ，或者离心 ，收集上清液进行 SDS-PAGE 检测。

➽免疫沉淀常见问题分析与解决方案

For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic applications.