Flag IP beads(Mouse)产品说明书

Cat# ： AP01-01 / AP01-02 / AP01-03
Size  ：    200ul   /     1ml     /     5ml                 

➽产品介绍:

Flag（DYKDDDDK）标签是由8个氨基酸组成的短肽，亲水性强，不会占据其他表位与结合域而易与抗体结合。Flag IP beads(Mouse)是将抗 Flag鼠单抗标签抗体共价偶联到4%琼脂糖凝胶为基质琼脂糖珠上，用于捕获哺乳动物、植物、细菌、酵母、昆虫等多种生物的细胞提取物中的含 Flag 标签的蛋白及与其紧密相互作用的蛋白，可用于 Flag 标签融合蛋白的免疫沉淀（IP），chIP实验与蛋白纯化。

➽产品性能：

Beads粒径：60-90 μm（4%交联琼脂糖珠）

储存液：1xPBS(pH7.4)， 0.2% Proclin 300

结合能力：>1mg DYKDDDDK 标签蛋白/ml beads

配体：抗Flag标签小鼠单克隆抗体

用量：25-50ul悬液/样本

储存条件: 2-8℃保存2年，切勿冰冻

➽免疫沉淀操作流程

1) 缓冲液准备与建议：

实验中用得到的水和buffer，使用前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。

各参考使用buffer体系表： 

2) beads准备：取25-50ul Flag IP beads(Mouse)混合液加入2 ml离心管中，5000×g离心1min，吸弃上清。

3) beads平衡：加入0.5ml平衡buffer，悬浮beads（使beads与目的蛋白处于相同的buffer体系下，可保护蛋白），5000×g离心1min，吸弃上清。重复2次。

4) 蛋白结合：加入200-1000ul样品裂解液到处理好的beads中，混合均匀，在室温下置于翻转混合仪轻轻翻转离心管，保证样品和beads充分接触结合，4℃孵育2-4h。5000×g离心1 min，吸弃上清。

5)  洗杂：加入0.5ml的洗杂buffer，悬浮beads，轻轻混匀，5000×g离心1 min ，吸弃上清。再重复三次。确保去除非特异性吸附。

6) 样品洗脱：可根据后期检测的需要选择不同的洗脱方法。

竞争性洗脱 - 加入100ul竞争性洗脱液洗脱。室温孵育20-30min,5000×g离心1min。小心取出上清，不要吸到beads。洗脱样品放置4℃, 长时间放置-20℃保存。

酸性洗脱 - 加入100ul酸性洗脱液，悬浮beads。室温孵育5 min, 5000×g离心1min。小心取出上清，不要吸到beads，按酸性洗脱液的1/10体积中和液中和。洗脱样品放置4℃ , 长时间放置-20℃保存。

变性洗脱 - 实验室常规蛋白上样缓冲液（Loading Buffer）中含有β-巯基乙醇或DTT,会导致beads上的Flag抗体重链和轻链断开。含有SDS的样品缓冲液可以使Flag IP beads(Mouse)抗体变性，洗脱后的Flag IP beads(Mouse)不能重复使用。每管中加入25ul 2×Loading Buffer，95℃加热10min。5000×g离心1 min，吸取上清 SDS-PAGE 电泳检测。

➽免疫沉淀常见问题分析与解决方案

For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic applications.