➽产品特色:
● 本裂解液经过优化配方,在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte) 或其它有细胞核的细胞;
● 本裂解液的主要有效成分为氯化铵;
● 本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解,例如鸟或禽类的红细胞。 ;
➽操作步骤:
对于组织细胞样品:
1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2. 加入 3-5 倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解 1-2 分钟。例如 细胞沉淀的体积为1ml,则加入 3-5ml 的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。
3. 400-500g 离心 5 分钟,弃红色上清。4ºC 离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 洗涤 1-2 次:加入适量 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g 离心 2-3 分钟,弃上清。可再重复 1 次, 共洗涤 1-2 次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的 5 倍。4ºC 离心效果更佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品(无洗涤):
1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2. 对于 0.2ml 细胞沉淀加入 1ml 红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解 1-2 分钟。本步骤在室温或 4ºC 操作均可。
3. 加入 15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。
4. 400-500g 离心 5 分钟,弃红色上清。4ºC 离心效果更佳。
5. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明:对于常规步骤,多一步洗涤过程中的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的 离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。
对于血液样品:
1. 取新鲜抗凝血,400-500g 离心 5 分钟,离心弃上清。
2. 加入 6-10 倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解 1-2 分钟。例如细胞沉淀的体积为 1ml,则加入 6-10ml 的红细胞裂解液。本步骤在室温或 4 度操作均可。
注意:对于鼠的血液,裂解 1-2 分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至 4-5 分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
3. 400-500g 离心 5 分钟,弃红色上清。4ºC 离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 洗涤 1-2 次:加入适量 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g 离心 2-3 分钟,弃上清。可再重复 1 次, 共洗涤 1-2 次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的 5 倍。4ºC 离心效果更佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注意:对于微量或少量的血液样品,可以在第一步中不进行离心弃上清的操作,直接在第二步中加入 10 倍血液体积的红细胞裂解液,并在室温或 4ºC 裂解 4-5 分钟。对于鼠的血液,裂解 4-5 分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至 10 分钟,但通常不宜超过 15 分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。
对于血液样品(无洗涤):
1. 每 1ml 新鲜抗凝血中加入 10ml 红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解 4-5 分钟。本步骤在室温或 4 度操作均可。
注意:对于鼠的 血液,裂解 4-5 分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至 10 分钟,但通常不宜超过 15 分钟,并且裂解过程中宜适 当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
2. 加入 20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。
3. 400-500g 离心 5 分钟,弃红色上清。4ºC 离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明:对于常规步骤,多一步洗涤过程的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的离 心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。