➽细胞冻存步骤：

1.常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中；

2.确认所需冻存的细胞数量；

3.将所需冻存细胞收集于离心管中，1000rpm，5min离心，收集细胞沉淀，并弃掉上清液；

4.加入适量的无血清细胞冻存液于离心管中，加入量按照细胞保存浓度为 5X105 至 1X107cells/ml密度，轻柔的混匀细胞，获取细胞混合液；

5.将获取的细胞混合液按照1~1.5ml/管，分装于冻存管中；

6.将冻存管直接放入-80℃保存，可长期保存；

7.若需要放到液氮中长期保存，需先在-80度保存>12小时再转入液氮罐。

➽细胞复苏步骤：

1.从-80℃取出冻存细胞，立即放入37℃水浴锅快速解冻；

2.待细胞混合液彻底解冻融化后，立即加入1ml细胞培养基，混合；

3.将混合液移至含有约5ml该细胞培养基的离心管中，1000rpm，5min离心，弃掉上清，获取细胞沉淀；

4.加入适量的新鲜细胞培养基，轻柔混匀，并将混合液转移至培养容器，观察细胞状态正常后，进行后续细胞培养工作。

➽储存运输：

常温运输，4℃保存，有效期 24 个月。

➽注意事项：

1. Y-Tec无血清细胞冻存液在冻存细胞分装后，需要尽量缩短在外存放时间，操作完成后需尽快移入到-80℃超低温冰箱中。

2. Y-Tec无血清细胞冻存液中含有DMSO成分，对于DMSO敏感的细胞株，以及非常规细胞株，比如原代细胞，干细胞（ES 细胞）等特殊细胞类型，均需要在使用前试用是否可以直接用该产品冻存目的细胞，先对所冻存的胞进行至少为期1-4周的该产品试验性细胞冷冻保存培养，确认没有任何问题后再进行正式大量冻存。

3. 为了保证Y-Tec无血清细胞冻存液的细胞存活率，若-80℃超低温冰箱经常开关，可能导致保存温度不能长期稳定在-80℃环境，这样会导致细胞存活率快速下降，可-80℃冻存12小时后，尽快转入液氮罐中长期稳定保存。

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